Cách tiến hành phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà để chẩn đoán bệnh cúm gia cầm H5N1 được quy định như thế nào?

Nội dung chính

• Phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà để chẩn đoán bệnh cúm gia cầm H5N1 cần chuẩn bị những gì?
• Cách tiến hành phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà để chẩn đoán bệnh cúm gia cầm H5N1 được quy định như thế nào?
• Phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà cho kết quả dương tính với bệnh cúm gia cầm H5N1 khi nào?

Phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà để chẩn đoán bệnh cúm gia cầm H5N1 cần chuẩn bị những gì?

Theo điểm a tiết 5.2.3.2 tiểu mục 5.2 Mục 5 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-26:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 26: Bệnh cúm gia cầm H5N1 quy định về việc chuẩn bị cho phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà như sau:

Cách tiến hành

...

5.2. Chẩn đoán phòng thí nghiệm

...

5.2.3.2. Phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà (HI)

a) Chuẩn bị:

Dung dịch PBS pH ~7,2 (xem A3 phụ lục A)

Hồng cầu gà 1 % (xem A4 phụ lục A)

Đĩa 96 giếng (xem 4.3)

Huyết thanh kiểm tra: Ngoại trừ huyết thanh gà, trước khi xét nghiệm các huyết thanh vịt, ngan ngỗng cần được vô hoạt bổ thể ở 56 °C trong 30 min và huyết thanh đó phải được xử lý với RDE (xem A5 phụ lục A) để chống hiện tượng ức chế giả. Ngoài ra huyết thanh vịt, ngan, ngỗng phải xử lý hấp phụ hồng cầu để tránh hiện tượng ngưng kết giả (xem A10 phụ lục A)

Kháng nguyên: Kháng nguyên chuẩn H5 được pha 4 đơn vị HA/25 μl (xem A9 phụ lục A).

...

Theo đó, để thực hiện được phương pháp găn trở ngưng kết hồng cầu gà để chẩn đoán bệnh cúm gia cầm H5N1 thì cần chuẩn bị:

- Dung dịch PBS pH ~7,2 (xem A3 phụ lục A)

- Hồng cầu gà 1 % (xem A4 phụ lục A)

- Đĩa 96 giếng (xem 4.3)

- Huyết thanh kiểm tra

- Kháng nguyên: Kháng nguyên chuẩn H5 được pha 4 đơn vị HA/25.

Ngoại trừ huyết thanh gà, trước khi xét nghiệm các huyết thanh vịt, ngan ngỗng cần được vô hoạt bổ thể ở 56 °C trong 30 min và huyết thanh đó phải được xử lý với RDE (xem A5 phụ lục A) để chống hiện tượng ức chế giả. Ngoài ra huyết thanh vịt, ngan, ngỗng phải xử lý hấp phụ hồng cầu để tránh hiện tượng ngưng kết giả.

Cách tiến hành phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà để chẩn đoán bệnh cúm gia cầm H5N1 được quy định như thế nào?

Theo điểm b tiết 5.2.3.2 tiểu mục 5.2 Mục 5 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-26:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 26: Bệnh cúm gia cầm H5N1 quy định về cách tiến hành phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà như sau:

Cách tiến hành

...

5.2. Chẩn đoán phòng thí nghiệm

...

5.2.3.2. Phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà (HI)

...

b) Cách tiến hành: xem phụ lục C.

...

Dẫn chiếu Phụ lục C iêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-26:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 26: Bệnh cúm gia cầm H5N1 quy định về phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà như sau:

Phụ lục C

(Quy định)

Phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà (HI)

Cho 25 μl PBS pH ~ 7,2 vào các giếng từ giếng 1 đến giếng 12. Cho 25 μl huyết thanh cần kiểm tra vào giếng 1.

Trộn đều huyết thanh với PBS ở giếng 2, chuyển 25 μl sang giếng 3 và trộn đều, chuyển 25 μl sang giếng 4, tiếp tục đến giếng 11, hút bỏ 25 μl ở giếng 11.

Cho 25 μl kháng nguyên 4 HA/25 μl vào các giếng từ 1 đến 11. Cho thêm 25 μl PBS vào giếng 12 làm đối chứng hồng cầu.

Lắc nhẹ trên máy lắc sau đó để đĩa ở nhiệt độ phòng 30 min.

Cho 25 μl hồng cầu gà 1 % vào mỗi giếng, lắc nhẹ trong 1 min. Để đĩa phản ứng ở nhiệt độ phòng. Đọc kết quả sau 30 min (xem sơ đồ dưới đây).

Sơ đồ các bước tiến hành phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà (HI)

Mỗi đĩa phản ứng phải có mẫu đối chứng kháng nguyên chuẩn hoặc kháng thể chuẩn làm tương tự như mẫu cần chẩn đoán để đảm bảo 4 HA/25 μl đã được sử dụng cho phản ứng là đúng, mục đích là để kiểm soát mẫu huyết thanh và mẫu bệnh phẩm khi làm phản ứng (mẫu này được gọi là mẫu đối chứng nội).

Để thực hiện phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà trước tiên cần cho 25 μl PBS pH ~ 7,2 vào các giếng từ giếng 1 đến giếng 12. Cho 25 μl huyết thanh cần kiểm tra vào giếng 1. Trộn đều huyết thanh với PBS ở giếng 2, chuyển 25 μl sang giếng 3 và trộn đều, chuyển 25 μl sang giếng 4, tiếp tục đến giếng 11, hút bỏ 25 μl ở giếng 11.

Cho 25 μl kháng nguyên 4 HA/25 μl vào các giếng từ 1 đến 11. Cho thêm 25 μl PBS vào giếng 12 làm đối chứng hồng cầu. Lắc nhẹ trên máy lắc sau đó để đĩa ở nhiệt độ phòng 30 min.

Cho 25 μl hồng cầu gà 1 % vào mỗi giếng, lắc nhẹ trong 1 min. Để đĩa phản ứng ở nhiệt độ phòng. Đọc kết quả sau 30 min

Cách tiến hành phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà để chẩn đoán bệnh cúm gia cầm H5N1 được quy định như thế nào? (Hình từ Internet)

Phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà cho kết quả dương tính với bệnh cúm gia cầm H5N1 khi nào?

Theo điểm c tiết 5.2.3.2 tiểu mục 5.2 Mục 5 Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-26:2014 về Bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán - Phần 26: Bệnh cúm gia cầm H5N1 quy định về kết quả phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà như sau:

Cách tiến hành

...

5.2. Chẩn đoán phòng thí nghiệm

...

5.2.3.2. Phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà (HI)

...

c) Đọc kết quả

Phản ứng âm tính: Có hạt ngưng kết lấm tấm, chứng tỏ không có kháng thể kết hợp với kháng nguyên trong phản ứng.

Phản ứng dương tính: Hồng cầu lắng xuống đáy, chứng tỏ kháng nguyên và kháng thể tương ứng. Hiệu giá kháng thể được tính ở độ pha loãng cao nhất còn có hiện tượng ức chế ngưng kết hoàn toàn.

Huyết thanh được coi là dương tính kháng thể kháng vi rút cúm gia cầm khi có hiệu giá HI ≥ 1/16 (4 log2).

Như vậy, phương pháp ngăn trở ngưng kết hồng cầu gà cho kết quả dương tính với bệnh cúm gia cầm H5N1 khi hồng cầu lắng xuống đáy, chứng tỏ kháng nguyên và kháng thể tương ứng. Hiệu giá kháng thể được tính ở độ pha loãng cao nhất còn có hiện tượng ức chế ngưng kết hoàn toàn.

Huyết thanh được coi là dương tính kháng thể kháng vi rút cúm gia cầm khi có hiệu giá HI ≥ 1/16 (4 log2).